厭氧培養箱之厭氧菌的培養操作

厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養厭氧菌，必須創造一個無氧的環境。通常用培養基中加入還原劑，或用物理、化學方法去除環境中的游離氧，以降低氧化還原電勢。如皰肉培養基、硫基乙酸鈉培養基，牛心腦浸液培養基等。常用的厭氧培養方法有許多，可根據實際情況選用。

1．厭氧缸法接種好標本的平板或液體培養基試管，可放入厭氧缸內培養，厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境，從而將厭氧菌培養出來。

2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內裝氣體發生管（有硼Q化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿）、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后，盡量擠出袋內空氣，然后密封袋口。先折斷氣體發生管，后折斷美蘭指示劑管，命名袋內在半小時內造成無氣環境。如不突變表示袋內已達厭氧狀態，可以孵育。

3．厭氧手套箱（Anaerobie glove box）即厭氧培養箱。它是一個密閉的大型金屬箱，箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板，板上裝有兩個手套，可通過手套在箱內進行操作，故名。箱側有一交換室，具有內外二門，內門通箱內先關著。欲放物入箱，先打開外門，放入交換室，關上外門進行抽氣和換氣（H2，CO2，N2）達到厭氧狀態，然后手伸入手套把交換室內門打開，將物品移入箱內，關上內門。箱內保持厭氧狀態，也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理。該箱可調節溫度，本身是孵箱或孵箱即附在其內，還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落，這種厭氧箱適于作厭氧細菌的大量培養研究，大量培養基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環境和溫度等均系自動調節。

4.厭氧盒：原理同厭氧袋，有成品銷售。

5.生物耗氧法：在一密閉的容器內放以生物（多是植物），消耗氧氣，同時產生二氧化碳，供細菌生長用。我沒見過。

6.焦性末食子酸法：在一潔凈的玻片上鋪上紗布或濾紙，均勻撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速將已接種細菌的平板倒扣在上面，用融化的白蠟封邊，造成一個封閉空間。焦性末食子酸與堿反應后耗氧。該法用于厭氧不嚴格的厭氧菌的培養，簡單。如有梭狀芽孢桿菌。

7.皰肉培養基：本身就是一個不需特殊設備的厭氧培養法。皰肉和肉湯裝入大試管，液面封凡士林，造成無氧環境。

操作室厭氧環境形成：按使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室內放入二個無毒塑料袋。通電源開照明燈，開控溫儀，調節所需溫度及安全溫度。操作室內放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉)。關緊取樣室內外門，并抽真空校驗。操作室內第一次置換（氮氣置換）：先用橡皮管插入操作室內進氣口，另一頭插入塑料袋。接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥，使二只塑料袋充足氮氣，然后扎緊袋口。把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。把塑料袋內氮氣漸漸地放于操作室內，至全部放出。操作室第二次置換（氮氣置換）重復一 次充氮過程，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。操作室第三次置換（混合氣體置換）：（混合氣體配比為：N2↑ 85% H2 ↑ 10% CO2↑ 5%）調換氣路打開混合氣道通閥門進氣，充氣時要隨時腳踏開關開閉排氣。混合氣充滿塑料袋后，關掉混合氣直通閥（三通閥），使混合氣經過流量計輸入操作并調整流量計，流量為每分鐘10毫升左右。把塑料袋內混合氣漸漸排于操作室內。通過三次換氣后，操作室內氣體含氧量已處于極微量狀態。操作室內打開鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一 小時后打開美蘭指示劑（美蘭安瓶）觀察其變色情況，不變色為操作室內達到厭氧環境。開紫外線滅菌燈，室內進行滅菌處理。滅菌時間自定。

厭氧培養箱注意事項：盡可能地安裝于空氣清靜，溫度變化較小的地方。開機前應全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的說明書、掌握正確的使用方法。培養物放入必須是在操作室內達到絕對厭氧環境后放入。如發生故障（停氣等原因）操作室內仍可保持12小時厭氧狀態。（超過12小時則根據需要把培養物取出另作處理）。經常注意氣路有無漏氣現象。調換氣瓶時，注意要扎緊氣管，避免流入含氧氣體。真空泵按要求使用，定期檢查加油。停止使用，關閉總電源鍵，及設備后部的電源開關。

YQX-Ⅱ厭氧培養箱是一種在無氧環境條件下進行細菌培養及操作的專用裝置。它能提供嚴格的厭氧狀態恒定的溫度培養條件和具有一個系統化、科學化的工作區域。在本裝置內操作培養，可以培養難生長的厭氧生物，又能避免以往厭氧生物在大氣中操作時接觸氧而死亡的危險性。因此本裝置是厭氧生物檢測科研的理想工具。本裝置也是一物多用的良好儀器，如改變操作方式，為微需氧菌的生長繁殖提供良好的生長條件。